一般处理胸腹水标本的方法是离心后进行涂片处理,接着在95%的乙醇下进行固定染色,最后借助显微镜进行阅片^[1]｡不过在长期的实践中发现这一检验方法制作成的切片通过镜下观察细胞集中度不高,同时数量较少,一旦发现存在可疑细胞,医师必须在较大的风险下完成该病的诊断｡所以,当前临床逐渐开始应用细胞沉渣石蜡切片技术进行胸腹水制片,本研究旨在分析该技术在胸腹水制片中的临床应用价值,现报道如下｡

1  资料与方法

1.1 一般资料

选取我院2014年1月至2016年1月接受的275份胸腹水标本,每份标本都采用普通细胞图片制作方法及细胞沉渣石蜡切片制作方法进行制片,由2名资历较高的细胞病理医师通过双盲法进行阅片｡

1.2  方法

1.2.1  普通细胞涂片制作

将胸腹水标本放置 30min,去除上清液,选择25~50ml底层液体,具体选取的底层液体量根据具体情况决定,如果标本澄清度较高,可以全部选取以保证足够的细胞量｡将选取的底层液体置于离心管,在2500r/mi的速度下进行10min的离心处理,结束后选择吸管将上清液吸掉,选择沉淀物上层细胞,滴在载玻片上并完成涂片,等到玻片中间部分稍干后放在浓度为95%的乙醇中进行10~15min的内固定,常规方法下完成HE染色 (图 1)｡

图 1 胸腹水普通细胞涂片 (HE染色)

1.2.2  细胞石蜡沉渣切片制作

将胸腹水标本放置 30min,去除上清液,选择 25~50ml 底层液体,具体选取的底层液体量根据具体情况决定,如果标本澄清度较高,可以全部选取以保证足够的细胞量｡将选取的底层液体置于离心管,在2500r/min的速度下进行10min的离心处理,结束后选择吸管将上清液吸掉,然后将20ml浓度为10%的中性甲醛加入到含沉淀物的离心管中,置于震荡仪中,在1200r/min的速度下进行持续10min的震荡,在2500r/min的速度下进行10min的离心处理,将上清液去除后借助镊子将沉淀物取出,利用擦镜纸包装好,常规方法下完成脱水､浸蜡､包埋､切片､染色各项处理 (图 2)｡

图 2 石蜡沉渣切片 (HE染色)

1.2.3  处理血性标本

假如胸腹水中含有较多的血性成分,必须清洗好离心管中的沉淀物,将红细胞去除,避免无关细胞对结果造成干扰｡ 将5ml冰醋酸及95ml浓度为25%的乙醇进行混合,将20ml混合液加入胸腹水中,混合后实施离心处理,接着加入10% 的中性甲醛进行固定及震荡离心等处理｡

1.2.4  制作细胞量偏少的标本

假如送检的胸腹水通过离心处理后发现没有足够细胞量, 选择蛋清液作为支架法完成细胞蜡块的制作｡离心以及沉淀标本后将上清液倒掉,将1ml蛋清液加入离心管中,尽可能保证蛋清中悬浮有底部细胞,接着在2500r/min的速度下进行10min的离心处理,将多余的蛋清去除,将2ml浓度为10% 的中性甲醛加入其中,慢慢晃动离心管,进行30min固定后将沉淀物取出,利用擦镜纸包装好,常规方法下完成脱水､浸 蜡､包埋､切片､染色各项处理｡

1.3  统计学处理 

选择 SPSS19.0统计软件进行分析,计数资料以率表示, 组间比较采用 χ 2检验,以 P<0.05为差异有统计学意义｡

2  结果

常规细胞涂片方法检出的腺癌细胞一共有 18例,检出率 为 6.55%;细胞沉渣石蜡切片检出的腺癌细胞一共有 41例, 检出率为 14.91%;细胞沉渣石蜡切片法腺癌检出率较常规 细胞涂片方法高,差异有统计学意义 (P<0.05)｡ 相较于常规细胞涂片,细胞沉渣石蜡切片法制作得到的切 片具有更清晰的背景,染色更为分明,能够收集更多的细胞, 同时这些细胞存在一定的组织结构｡另外细胞沉渣石蜡切片的 免疫组化标记证实了两种方法诊断的腺癌细胞 (图 3和图 4)｡

图 3 细胞沉渣免疫组织化学标记 CD56

图 4 细胞沉渣免疫组织化学标记 TTF-1

 
3  讨论

胸腹水涂片检查很容易受到不同因素的影响,使诊断难度加大,这些因素包括染色质量､标本放置时间､厚薄适中程度､涂片均匀程度等｡如果涂片太厚,细胞会相互重叠, 相反如果太薄,会由于细胞数量较少导致诊断无法准确进行^[2]｡假如发现细胞可能为肿瘤细胞,必须实施免疫组化标记,并且将剩下的标本重新离心后制片｡不过由于细胞转移等原因降低细胞量导致后期免疫组化鉴别诊断无法得到满足,不能完成定性诊断^[3]｡

相较于常规涂片,细胞沉渣石蜡切片技术制作出来的切片细胞相对集中,能够降低甚至避免视野过大造成细胞遗漏的情况;不会因为涂片太厚造成细胞结构不清､成团､重叠等情况出现,对病理诊断造成影响^[4] ;胸腹水沉渣石蜡包埋处理后,可以对蜡块进行多次连续且反复的切片,为了使恶性肿瘤的组织来源得到明确,另外可以同时实施免疫组化染色及特殊染色｡相较于直接涂片,这一技术不会有掉片现象出现,保证染色定位准确,提高背景清晰度,能够保证诊断的准确性,从而能够保证细胞学切片具有一致性^[5]｡

综上所述,胸腹水利用细胞沉渣石蜡切片技术能够降低切片的风险,保证诊断的准确性,使患者等待结果的时间明显缩短,能够更快确定病因,给予正确的针对性治疗｡


[参考文献]
[1]周秋媛,张惠箴,蒋智铭,等.胸腹水沉渣包埋切片中 Napsin- A､CK7､TTF-1等的表达及临床意义 [J].临床与实验病理学杂志,2013,29(6):671-673.
[2]朱小兰,骆新兰,武鸿美,等 .微波技术在胸腹水沉渣切片 应用 [J].临床与实验病理学杂志,2013,29(11):1260-1261.
[3]张洋,车千红,闫禄春.过滤法在胸腹水沉渣包埋切片制作中的应 用 [J].临床与实验病理学杂志,2013,29(6):693-694.
[4]孙廷谊,李真,谢红建,等 .GS液在胸腹水沉渣切片中的应 用 [J].诊断病理学杂志,2014,21(7):468.
[5]黄金长,张功亮,郭广秀,等 .细胞块石蜡包埋及免疫细胞化学染色技术在胸腹水细胞病理学诊断中的应用价值 [J].实验与检验医学,2013,31(5):489-490.