乙型肝炎是一种传染性较强且发病率较高的疾病，也是全球性的公共卫生问题 ^[1]。随着疫苗接种的普及，乙型肝炎病毒感染率呈下降趋势，但乙型肝炎目前在我国仍属于重大传染性疾病。乙型肝炎病毒感染起病缓慢，以亚临床型及慢性常见，可引起肝脏的炎症和纤维化，严重时甚至可发展为肝硬化及肝癌 ^[2]。乙型肝炎病毒表面抗体（Hepatitis B virus surface antibodies，HBsAb）对于预防乙型肝炎病毒感染非常重要。根据世界卫生组织（World Health Organization，WHO） 建议，HBsAb 浓 度 ≥10 mIU/ml 视为可有效预防乙型肝炎病毒感染。检测 HBsAb 不仅可判断乙型肝炎疫苗是否接种成功，还可用于评估乙型肝炎病毒感染患者的康复情况。HBsAb 的检测方法包括化学发光法、酶联免疫吸附法、时间分辨免疫荧光法、胶体金法等，其中化学发光法和酶联免疫吸附法具有灵敏度高、稳定性好等优点，是目前临床常用于检测HBsAb 的方法。基于此，本研究分析以化学发光法、酶联免疫吸附法为检测原理的不同检测系统对 HBsAb 国家标准品、全阴性样品和强阳性样品检测结果的阴阳性判读一致性，并比较其中 10 个化学发光法测系统检测结果与国家标准品浓度之间的偏差，现报道如下。

1  材料与方法

1.1  样品

使用乙型肝炎五项全阴性血浆，将批号为 300015-201802 的 HBsAb 国家标准品（溯源至 WHO， 浓度 160 mIU/ml）按比例稀释为 100、50、30、20、12、6 mIU/ml 6 个样品，分别编为 4^# 、6^# 、7^# 、1^# 、8 ^# 、5^# ，作为阳性样品、弱阳性样品及临界值附近的阴性样品。取 1 份 HBsAb 浓度 > 1 000 mIU/ml 的样品作为强阳性样品，编号为 2^# 。将用于稀释批号为300015-201802 的 HBsAb 国家标准品的全阴性血浆编号为 3^# 。样品浓度及编号见表 1。

表 1 样品浓度及编号

注：1^# 、4^# ~ 8^# 样品为溯源至 WHO 的 HBsAb 国家标准品。根据 WHO 规定，HBsAb 参考临界值为 10 mIU/ml

1.2  检测系统

检测系统包含 11 个化学发光法检测系统和 8 个酶联免疫吸附法检测系统，分别随机编号为 1 ~ 19。

1.3  方法

按试剂盒说明书进行检测，测试前将样品取出并在室温下复温，充分混匀后进行测试，每份样品平行检测 2 次。按照检测系统试剂盒说明书要求进行阴阳性判读。

序号为 1~4、11、13~16、19 的检测系统的结果阴阳性判读规则：<10 mIU/ml 为阴性，≥ 10 mIU/ml为阳性，临界值为 10 mIU/ml。

序号为 7 的检测系统的结果阴阳性判读规则：< 1.0 S/CO 为阴性，≥ 1.0 S/CO 为阳性，临界值为1.0 S/CO。

序 号 为 5、6、8 ~ 10、12、17 ~ 18 的 检 测 系统的结果阴阳性判读规则：< 0.105 S/CO 为阴性，≥ 0.105 S/CO 为阳性，临界值为 0.105 S/CO。

2  结果

2.1  19 个检测系统对 HBsAb 的阴阳性判读结果分析

以阴阳性判定 19 个检测系统检测结果的一致性。19 个检测系统对 1^# ~ 2^# 、4^# 、6^# ~ 8^# 样品均判读为阳性，对 3^# 样品均判读为阴性；4、6、15、16 检测系统对 5^# 样品判读为阳性，其余 15 个检测系统对 5^# 样品判读为阴性。19 个检测系统对 8 个样品的阴阳性判断结果见表 2，5^# 样品检测结果和阳性判读规则见表 3。

表 2 19 个检测系统检测结果阴阳性判读汇总

注：“+”为阳性结果，“-”为阴性结果

表 3 5^# 样品（临界值附近的阴性样本，浓度为 6 mIU/ml）测试结果汇总

注：“+”为阳性结果，“-”为阴性结果

2.2  10 个化学发光法检测系统对 HBsAb 的定量检测结果与 HBsAb 国家标准品理论值的比较

由于序号为 1~4、11、13~16、19 的 10 个检测系统的判定临界值与 HBsAb 国家标准品说明书要求的临界值（10 mIU/ml）一致，因此，本研究只分析此10 个系统对 HBsAb 的定量检测结果与 HBsAb 国家标准品理论值之间的偏差。 对 1^# 、4^# 、5^# 、6^# 、7^# 、8^# 样品（溯源至 WHO 的 HBsAb 国家标准品）进行检测，10 个检测系统的总平均值分别为26.7、105.3、9.6、60.0、38.9、18.5 mIU/ml。 对 于1^# 、4^# 、6^# ~8^# 样品，10 个检测系统的检测结果均位于阳性区间（≥ 10 mIU/ml），见图 1 ~ 2、图 4 ~ 6。对于 5^# 样品，仅序号为 4、15、16 检测系统的检测结果位于阳性区间（≥ 10 mIU/ml），见图 3。10 个检测系统对6个HBsAb国家标准品配制的样品（1^# 、4^# 、5^# 、6^# 、7^# 、8^# ）的检测结果与 HBsAb 国家标准品理论值之间的相对偏差分别为105% ~ 188%、84% ~ 139%、122% ~ 249%、77% ~ 185%、99% ~183%、106% ~ 258%。

图 1 1^# 样品（检测系统总平均值为 26.7 mIU/ml）

图 2 4^# 样品（检测系统总平均值为 105.3 mIU/ml）

图 3 5^# 样品（检测系统总平均值为 9.6 mIU/ml）

图 4 6^# 样品（检测系统总平均值为 60.0 mIU/ml）

图 5 7^# 样品（检测系统总平均值为 38.9 mIU/ml）

图 6 8^# 样品（检测系统总平均值为 18.5 mIU/ml）

3  讨论

HBsAb 是人体在乙型肝炎表面抗原（Hepatitis B virus surface antigen，HBsAg）的刺激下产生的1种中和抗体，可与 HBsAg 结合，在人体免疫系统中起到消灭乙型肝炎病毒的作用 ^[3-5]。因此，HBsAb 常用于评估机体对乙型肝炎病毒的免疫状态。由于目前临床上尚无治疗乙型肝炎患者的特效药物或方法，患者即使在得到有效治疗后仍会携带乙型肝炎病毒，因此，早筛查、早评估、早干预对于疾病诊治具有十分重要的作用。血清学免疫检测技术在 HBsAb 早期检测中具有无创、无痛、安全、经济、重复性好等优点。尤其是化学发光法具有快速、准确、灵敏、安全无污染、自动化程度高等特点，被广泛应用于传染病等的临床诊断，在大型三甲医院中，其正逐步取代传统的酶联免疫吸附法 ^[6-9]。但酶联免疫吸附法因具有成本较低、灵活性好的优点，在社区医院等小型医院具有一定应用优势。

本研究选取的 19 个检测系统的方法学覆盖了临床最常用的化学发光法和酶联免疫吸附法。按试剂盒说明书判读阴阳性时，19 个检测系统对阳性及阴性样品（不包含临界值附近的阴性样品）均可做出准确判读。19 个检测系统对 5^# 样品（HBsAb 国家标准品配制的临界值附近的阴性样品）的阴阳性判读不一致，推测可能与检测系统的检测灵敏度、特异度、准确度不同相关 ^[4，10-11]。当 HBsAb 结果为阳性时，认为机体对乙型肝炎病毒产生免疫保护机制。溯源不同的检测系统的 HBsAb 检测结果间存在差异。多项研究也表明，不同检测系统检测HBsAb 的阳性符合率可达 80% 及以上 ^[4，12-13]。本研究分析的 19 个检测系统检测 HBsAb 阳性样品的阳性符合率、纯阴性样品的阴性符合率较高，均可达到 100%，检测临界值附近阴性样品的阴性符合率仅为 79%，总体阴阳性判读一致性符合率为 97%。

化学发光法检测 HBsAb 不仅可做定性判断，还可定量检测 HBsAb 浓度，从而可评估免疫保护效果，已逐渐成为临床检测乙型肝炎病毒标志物的主流方法 ^[14]。采用化学发光法检测 HBsAb 的检测系统较多，可使用标准品比较不同检测系统的结果。HBsAb 国家标准品是《中华人民共和国药品管理法》指定的药品检验机构发布的 1 种具有溯源性的标准品，被作为评判检测系统检测性能（可靠性、准确性）的标准品。本研究定量分析了10 个判定值与 HBsAb 国家标准品说明书要求的临界值（10 mIU/ml）一致的化学发光法检测系统的检测结果。10 个检测系统对 1^# 、4^# 、5^# 、6^# 、7^# 、8^# 样品检测结果的总平均值均高于溯源至 WHO 的HBsAb 国家标准品理论值（正偏差）。10 个检测系统中每个系统对 1^# 、5^# 、8^# 样品的检测平均值均高于 HBsAb 国家标准品理论值；对于 4^# 、6^# 、7^#样品，10 个检测系统中分别有 3、4、2 个的检测平均值低于国家标准品理论值，有 7、6、8 个的检测平均值高于国家标准品理论值，其中序号 4、14、15 的检测系统对 1^# 、4^# 、5^# 、6^# 、7^# 、8^#样品的检测结果与 HBsAb 国家标准品理论值差距均较大。以上结果分布体现了目前不同检测系统的HBsAb 定量结果与 HBsAb 国家标准品理论值一致性不高。同时不同的检测系统的 HBsAb 定量结果存在一定差异 ^[14]。连续监测同一患者的 HBsAb 浓度，可动态观察病情变化，判断患者对乙型肝炎病毒的免疫状态 ^[2]。而不同检测系统间检测结果的差异可能会影响对患者免疫状态的评估。

综上所述，19 个检测系统对 HBsAb 阳性样品、阴性样品的阴阳性判读均一致，对临界值（10 mIU/ml）附近的阴性样品（浓度：6 mIU/ml）的阴阳性判读不一致，但总体阴阳性判读一致性较好。10 个化学发光法对 HBsAb 的定量结果差异较大。若需监测机体 HBsAb 浓度的变化趋势，应尽可能选用同一检测系统进行检测，以确保结果的一致性。

【参考文献】

［1］牟洪香，王李鸣，辛华，等 . 化学发光法与酶联免疫法应用于乙肝病毒血清学检验中的效果及准确性分析 [J]. 广东化工，2020，47（15）：275-276.

［2］赵令剑 . 化学发光免疫分析法在乙型肝炎病毒标志物检测中的应用价值 [J]. 医疗装备，2020，33（7）：46-47.

［3］乔艳红，谷泽亮，张湔，等 . 乙肝病毒表面抗体TRFIA 方法的建立及其应用 [J]. 标记免疫分析与临床，2007，14（1）：24-26.

［4］常楠 . ECLIA 与 ELISA 行乙肝病毒血清检验的效果比较 [J]. 中国卫生标准管理，2022，13（7）：36-39.

［5］李金明 . 乙型肝炎病毒血清标志物测定及结果解释的若干问题 [J]. 中华检验医学杂志，2006，29（5）：385-389.

［6］唐莲，唐艳，朱咏贵，等 . 酶联免疫法检测小儿乙肝PreS1抗原及抗体在乙肝诊断中的应用价值 [J]. 实用检验医师杂志，2017，9（3）：146-149.

［7］秦小林 . 某血站8种酶联免疫吸附试验检测试剂检测结果待查情况调查 [J]. 实用检验医师杂志，2019，11（4）：211-213.

［8］黄赛男 . 使用两种免疫检验方法检测乙型肝炎患者体内乙肝血清学标志物的效果对比 [J]. 当代医药论丛，2019，17（18）：152-153.

［9］刘志茹 . 化学发光法和酶联免疫法在乙型肝炎病毒血清学检验中的应用效 果比较 [J]. 中国当代医药，2018，25（36）：137-139.

［10］方积乾，陆盈 . 现代医学统计学 [M]. 北京：人民卫生出版社，2002.

［11］徐圣 . 分析体外生物诊断试剂的质量评价 [J]. 化工设计通讯，2017，43（4）：148.

［12］张勇，王锋，马景臣，等 . 乙型肝炎病毒标志参比系统的建 立 [J]. 中国疫苗和免疫，2009，15（5）：385-387.

［13］王娜娜，王婷婷 . 化学发光法与酶联免疫吸附试验在乙型肝炎病毒血清学检验中的应用 [J]. 实用检验医师杂志，2022，14（1）：13-16.

［14］张静，钟丽，姚孝明，等 . 不同检测系统间乙型肝炎病毒表面抗体结果一致性及影响因素分析 [J]. 标记免疫分析与临床，2022，29（4）：711-714.

内容来源于《医疗装备》杂志，如需转载请注明出处。