分枝杆菌可以分成结核分枝杆菌、非结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌3种，结核病、非结核分枝杆菌感染是影响人们健康的重要传染病^［1］，近些年来其感染率有上升趋势，由于非结核分枝杆菌感染与结核病在临床症状、X线片特征、痰液涂片的特征非常相似，故而临床上很容易出现漏诊、误诊病例^［2］，进而导致治疗方案的错误，影响患者的健康。因此，选择一种有效的检测方法对分枝杆菌感染的菌种进行鉴别十分重要。我科将基因芯片技术与涂片抗酸染色技术进行对比研究，现报道如下。

１　资料与方法

１.１　一般资料

从我院门诊与住院患者中选出疑似有分枝杆菌感染的患者324例作为观察对象，采集患者的尿液标本、脓液标本、痰液标本，患者中男132例，女192例，年龄18～55岁，平（39.5±6.3）岁。

１.２　方法

涂片抗酸染色技术：其中痰液标本先采用2% N－乙酰半胱氨酸－氢氧化钠进行前处理，加入到无菌PBS中进行洗涤后离心处理，取出沉淀的涂片。其余标本也经离心后取沉淀涂片。然后对标本进行初染，用石碳酸复红液进行染色，直接在涂片上滴石碳酸复红液后，将涂片在火焰上加热后使其产生蒸汽，约5min后进行水洗处理。接着进行脱色处理，约1min后轻轻摇动玻片，显示无红色脱出或是显示为粉红色时停止，水洗。接着对第三液进行复染约30s，水洗，待涂片干燥后镜检，其中抗酸杆菌在镜检下呈红色。基因芯片技术：（1）样本处理。采用晶芯Extractor36核酸快速提取仪对标本震荡5min后将标本置于95℃干浴5min，接着采用12000r／min的速度离心1min，取得核酸。（2） 聚合酶链反应（PCR）扩增处理。取出2μl核酸加入到PCR扩增试剂中进行扩增处理，同时取1管结核分歧杆菌（ＭＴＢ） 阳性质控品和ＭＴＢ阴性质控品进行扩增处理，作为质量控制样品。（3）杂交。打开杂交仪并预热到50℃。在杂交盒的沟槽中加入200μl纯化水，将芯片正面向上放入盒中，盖片4个凸面向下盖在芯片上。将预热的杂交液和PCR产物按比例混合，从芯片加样孔加入到芯片的点阵上，密封好杂交盒水平放入50℃预热好的杂交仪中，杂交时间为2h。对阳性质控品和阴性质控品重复上述步骤。（4）洗涤芯片。取出杂交好的芯片移至芯片洗干仪中，开始洗涤，时间为10min。（5）芯片扫描及保存。打开TBMDR Test软件预热10min，录入样本信息，输入芯片编号，并确定文件保存路径，将芯片放置扫描仪中，开始扫描。扫描完成后，标记杂交日期检测人的资料及样品范围，常温保存。

１.３　统计学处理

采用SPSS19.0统计软件进行分析，计数资料以率表示，组间比较采用X²检验，Ｐ＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

经检测，涂片抗酸染色技术检测出24份阳性标本，阳性率为7.41% （24／324），基因芯片技术则检测出31份阳性标本，阳性率为9.57% （31／324），差异有统计学意义（X² ＝41.236，Ｐ＜0.05）。且基因芯片技术能鉴别出ＭＴＢ和非结核分歧杆菌（NTM），其中有25份为MTB，占80.65%（25／31），6份为NTM，占19.35% （6／31）。

3　讨论

基因芯片技术最早于20世纪90年代出现，其对病原体核酸能快速进行高通量的检测，依据反向斑点分子杂交法原理，实现PCR技术和探针技术的优势互补，对标本进行快速、敏感、特异检测，结果非常直观，且无须进行标本的培养，操作简单^［3－4］。在分枝杆菌的鉴定检测中，有学者曾用基因芯片技术鉴定了27种分枝杆菌中的26种^［5］。在分枝杆菌的鉴定上，传统涂片抗酸染色技术的敏感性差，且对检验人员的要求较高，检测中受到的干扰因素较多，故而很容易出现漏诊、误诊情况。在本研究中，对我科324例疑似分枝杆菌感染病例进行检测，发现采用涂片抗酸染色技术检测的阳性率明显低于采用基因芯片技术检测（Ｐ＜0.05），说明涂片抗酸染色技术检测容易导致漏诊。而且，涂片抗酸染色技术无法鉴别出分枝杆菌的类别，进而对临床诊疗产生一定影响，容易导致治疗的失败。

而基因芯片技术则能对分枝杆菌的病原菌进行鉴别诊断，鉴别出是NTM感染还是MTB感染。本研究中应用基因芯片技术检测出25份MTB感染的样本，6份NTM感染的样本。石玉玲等^［6］的研究发现，对采用涂片抗酸染色检测阳性的患者采用一般结核方案治疗，结果发现效果不明显，因此对患者重新进行基因芯片检测，发现为NTM感染，并检测出具体的病原菌，予以对症治疗后患者的病情很快得到好转，证明基因芯片技术在分枝杆菌的鉴定诊断上具有重要应用价值。而且，基因芯片技术的操作非常方便，从采集样本到出具检测报告的时间不超过6h，用于早期诊断和鉴别诊断具有重要临床意义^［7］。而且，基因芯片技术具有高通量，能同时进行临床上常见的17种分枝杆菌检测，直接对DNA片段进行检测，无须接触结核分枝杆菌活菌，对检测人员的安全防护更好。

总之，基因芯片技术在分枝杆菌的鉴定诊断中具有重要临床价值，用于分枝杆菌感染的早期辅助诊断具有重要意义，应在临床检验中推广应用。

［参考文献］
［1］ 李晓非，梁桂亮，普冬，等.基因芯片技术在分枝杆菌菌种鉴定和结核耐药性检测中的应用及评价［J］.中国实验诊断学，2015，19（2）：204－207.
［2］ 陈建芸，石玉玲，李林海，等.结核耐药基因的基因芯片检测及临床应用［J］.生物技术通讯，2012，23（4）：589－591.
［3］ 赵连爽，代娣，陈昕，等.基因芯片在分枝杆菌菌种鉴定及结核耐药基因检测的诊断价值［J］.检验医学与临床，2014，15（12）：1595－1598.
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［5］ 刘军兰，张诚，王红林，等.应用基因芯片检测分枝杆菌在关节结核早期诊断中的临床应用［J］.中国临床研究，2013，26（5）：498－499.
［6］ 石玉玲，陈建芸，李林海，等.应用基因芯片快速检测分枝杆菌［J］.生物技术通讯，2011，22（3）：419－423.
［7］ 何莉，任微，梁雪妮，等.DNA芯片检测分枝杆菌的临床应用价值［J］ .中华临床医师杂志（电子版），2013，7 （23）：10611－10613.