VHL 基因是一种抑癌基因，其蛋白 pVHL30 和 pVHL19 具有肿瘤抑制的功能，两者结构相似， 统称 VHL 蛋白  （pVHL）。缺氧诱导因子 HIF 基因是 VHL 基因的一个靶基因，  HIF是细胞缺氧时产生的氧依赖性转录激活因子，由 α 和  β 亚基组成。氧主要通过 HIF-α 来调节 HIF 的活性^[1-2]。  pVHL/HIF 信号途径对胚胎的发育和机体组织的生长、创伤  与修复均有重要的调控作用，HIF-1α 是生长因子刺激细胞生长之所需，在缺氧状态下，抑制 HIF-1α 的表达可促使生长细胞死亡。 

1  材料与方法 

1.1  研究材料 

肝癌细胞（HepG₂）大鼠 CBRH-7919 肝癌细胞株（中山大学北校区动物实验中心提供）通过在 CO₂ 培养箱内（37 ℃，  5% CO₂，饱和湿度）用含 10% 胎牛血清的 RPMI1640（GIBICO 公司）进行体外培养，将生长状态良好的肝癌细胞消化后，以 10×10⁴ /L 密度接种于６孔板培养 24 h 后，加入不同浓度氯化钴溶液来模拟缺氧环境。按氯化钴终溶度分为 0 μmol/L  （对照组）、150 μmol/L（A 组）和 300 μmol/L （B 组）3 组，  处理时间分别为 4 h 和 8 h。观察并对比氯化钴不同浓度和不同作用时间对肝癌细胞 VHL 和 HIF-1α 的表达影响。

1.2  统计学处理

应用 SPSS11.5 统计软件分析数据，计量资料以x±s 表示，采用 t 检验，以 P<0.05 为差异有统计学意义。

2  结果

2.1  氯化钴的不同浓度和不同作用时间对肝癌细胞 VHL 的表达影响 

对照组 VHL 在肝癌细胞中的表达并未随时间增加而变化（P>0.05）；A 组和 B 组的肝癌细胞中 VHL 的表达在 4 h  和 8 h 均显著低于对照组（P<0.05）；且 A 组和 B 组肝癌细胞中 VHL 的表达在 8 h 显著低于 4 h（P<0.05）；此外，在 4 h B 组肝癌细胞中 VHL 的表达也显著低于 A 组（P<0.05），但在 8 h 仅为略低，差异无统计意义（P>0.05）。见表 1。 

表 1　氯化钴的不同浓度和不同作用时间对肝癌细胞 VHL 表达的影响（x±s）
注：与对照组比较，^aP<0.05；与同组 4 h 比较；^bP<0.05；与  A 组 4 h 比较，^cP <0.05 

2.2  氯化钴的不同浓度和不同作用时间对肝癌细胞 HIF-  1α 的表达影响 

对照组肝癌细胞中 HIF-1α 的表达在 4 h 和 8 h 并没有明显变化（P>0.05）；A 组和 B 组的肝癌细胞中 HIF-1α  的表达在 4 h 和 8 h 均显著高于对照组（P<0.05）；且 A 组肝癌细胞中HIF-1α 的表达在 8 h 也显著高于 4 h（P<0.05）；此外，在 B 组 4 h 肝癌细胞中 HIF-1α 的表达也显著高于A 组 4 h（P<0.05）。见表 2。 

表 2　氯化钴的不同浓度和不同作用时间对肝癌细胞 HIF-  1α 表达的影响

  注：与对照组比较，^aP<0.05；与 A 组 4 h 比较，^bP<0.05；与  A 组 4 h 比较，^cP <0.05 

3  讨论 

pVHL/HIF 信号调控异常与肿瘤的发生发展有关，VHL在肾透明细胞癌中的突变超过 50%，pVHL/HIF 信号异常是  肾透明细胞癌转化的关键，恢复 VHL 的正常表达能增强肾癌细胞的粘附性、促使细胞展平和降低细胞的侵袭力^[3-4]。  在晚期结直肠癌中，pVHL 低表达的同时伴有 HIF-1α 稳定表达，通过细胞实验证实 VHL/HIF-1α 信号调控异常参与了结直肠癌的形成。当 HIF-1 被抑制时，苏尼地尼（Sunitinib）能完全抑制结直肠癌中肿瘤血管的形成和灌注，提高了肿瘤对苏尼地尼的治疗反应。目前，pVHL/HIF 信号调控异常已成为众多肿瘤的研究热点，但其在肝癌中的研究国内外报道很少。根据相关文献报道称丙肝病毒也可通过稳定 HIF-1α 的表达促进肝癌细胞合成 VEGF，通过 RAN 干扰和拮抗等方法抑制 HIF-1α 表达，除能抑制小鼠种植肿瘤的生长外，还能下调 HIF-1α 和 VEGF 在肝脏中的表达水平。但目前仍缺少 pVHL/HIF 信号途径在肝癌发展过程中的研究，尤其是肝癌经导管动脉化疗栓塞（TACE）后所致进一步缺血性缺氧时 pVHL/HIF 信号调控机制的研究。 

本课题研究数据表明肝癌细胞中 VHL 和 HIF-1α 的表达在缺氧环境下显著降低。作为 pVHL/HIF 信号途径在胚胎发育和各种肿瘤中的最新研究成果，以及缺氧对肝癌细胞的影响和 TACE 在中晚期肝癌中的治疗现状，拟采用氯化钴作为缺氧诱导剂，通过模拟缺氧态细胞培养环境，系统研究缺氧的不同时相和不同程度对人肝癌细胞株 pVHL 和 HIF-1α 的表达影响，肝癌细胞在缺氧环境中存活的机制，VHL 和 HIF 间的调控关系，并探讨其可能的信号途径，  从而建立起一个行之有效的原发性肝癌肝动脉化疗栓塞术（TACE）术后缺氧微环境的实验模型，为提高肝癌 TACE 的治疗效果奠定理论基础，并为肝癌的靶向治疗提供新的靶点。 

综上所述，肝癌细胞中 VHL 和 HIF-1α 的表达在缺氧环境下显著降低，可作为肿瘤疾病治疗中的参考依据。 

［参考文献］
［1］朱慧敏，常彬，赵霞．缺氧诱导因子-1在卵巢癌中的研究进展 [J].  临床与实验病理学杂志，2012，28（1）：67-69．
［2］屈振杰，张惠洁，郭卫东．Livin、缺氧诱导因子 -1α 在结肠癌中的表达及意义 [J]. 中华临床医师杂志（电子版），2011，5（10）：  3005-3007．
［3］金炜东，马丹丹，蔡逊，等 . 缺氧诱导因子1α 在肝癌细胞上皮 - 间充质化中的作用 [J]. 中国普通外科杂志，2013，22（7）：885-889.
［4］何前进，刘利平，岑红兵，等 . 缺氧诱导因子与肝癌关系的研究进展 [J]. 中华临床医师杂志（电子版），2013，7（20）：9312-  9314.